产品内容：
提取液：液体25 mL×1瓶，4℃保存；  
试剂一：液体25 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入2mL丙酮
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；溶于1mL丙酮，可分装后-20℃保存。临用前再用丙酮100倍稀释后使用，现用现配。
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，现配现用；   
工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三1:1混合，现配现用。
产品说明：
复合体Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使O2还原生成O2-，是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、丙酮、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、复合体的提取： 
(1) 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
(2) 4 ℃ 600 g离心10min。
(3) 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。
(4) 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
(5) 在沉淀中加入400μL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅰ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
二、测定步骤：
1. 紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热15min。
3. 操作表：在1mL石英比色皿中分别加入
试剂名称
测定管
样本
50
试剂一
770
工作液
100
试剂四
80
将上述试剂分别加入比色皿后迅速吹打混匀，记录第10s的吸光值A1，迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中准确反应2分钟，之后迅速取出比色皿并擦干，记录2min时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
三、复合体Ⅰ活力单位的计算：  
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅰ活力（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 

相关文献：
《GSK3β-mediated tau hyperphosphorylation triggers diabetic retinal neurodegeneration by disrupting synaptic and mitochondrial functions》 作者:Huazhang Zhu, Weizhen Zhang, Yingying Zhao, Xingsheng Shu, Wencong Wang, Dandan Wang, Yangfan Yang, Zhijun He, Xiaomei Wang & Ying Ying  期刊:Molecular Neurodegeneration 影响因子:8.274 PMID:30466464
《Weanling Offspring of Dams Maintained on Serine-Deficient Diet Are Vulnerable to Oxidative Stress》 作者:Liuqin He, Haiwen Zhang, and Xihong Zhou 期刊:Oxidative Medicine and Cellular Longevity 影响因子:4.868 PMID:30305866
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638
《Age-dependent expression of the Vitamin D receptor and the protective effect of Vitamin D receptor activation on H2O2-induced apoptosis in rat intervertebral disc cells》 作者:TongTonga1ZhihuiLiub1HuaZhangcJingleiSuncDongxiaZhangdFengWangaDechaoMiaoaYongShen 期刊:Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology 影响因子:3.785 PMID:30905826
《Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke -induced airway epithelial cell injury model》 作者:Muyun Wang,Yanbei Zhang,Mengmeng Xu,HaiZhang,Yuqing Chen,Kian Fan Chung,Ian M.Adcock,Feng Li 期刊:Free Radic. Biol. Med. 影响因子:5.657 PMID:30639616
《Nitrogen-doped graphene quantum dots (N-GQDs) perturb redox-sensitive system via the selective inhibition of antioxidant enzyme activities in zebrafish.》 作者:Shun Deng,Ailing Fu,Muhammad Junaid,Yan Wang,Qian Yin,Chen Fu,Li Liu,Dong-Sheng Su,Wan-Ping Bian,De-Sheng Pei 期刊:Biomaterials 影响因子:10.273 PMID:30925289
《The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility》 作者:Fengjiao Jin, Zhaozhen Wu, Xiao Hu, et al. 期刊:Cancer Biol Med 影响因子:4.467 PMID:31119045
《Promotion of Mitochondrial Biogenesis via Activation of AMPK‐PGC1ɑ Signaling Pathway by Ginger (Zingiber officinale Roscoe) Extract, and Its Major Active Component 6‐Gingerol》 作者:Xiaohong Deng , Siwei Zhang,  Junzhen Wu , Xianjun Sun , Ziyin Shen,  Jingcheng Dong  ,Jianhua Huang 期刊:Food Chemistry 影响因子:5.399 PMID:31369153