产品内容: 
提取液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。 
试剂一：粉剂 0.1g×3 支，4℃保存。（使用前根据样品数，每支加 1mL 水溶解，每支为 10 个样品用量） 
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。 
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。 
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。 
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。（自备） 
试剂六：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
 
产品说明： 
蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化 损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。 羰基与 2,4-二**苯肼反应生成红色 2,4-二**苯腙，在 370nm 处有特征吸收峰。 
 
自备实验用品及仪器: 
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、蒸馏水， 无水乙醇和乙酸乙酯。
 
操作步骤： 
一、样品处理组织样品：称取约 0.1g 组织样品，加入 1mL 提取液，充分匀浆后于 4℃，5000rpm 离心 10min， 取上清，加入 0.1mL 试剂一，室温放置 10min，4℃，12000rpm 离心 10min，取上清，然后取 20μL 测定蛋白含量，剩余的作为待测样品。 
 
二、测定步骤和操作表 
 
空白管
测定管
样品（mL）
0.2
0.2
试剂二（mL）
 
0.4
试剂三（mL）
0.4
 
混匀，37℃避光反应 1h
试剂四（mL）
0.5
0.5
静置 5min，4℃，12000rpm 离心 15min，弃上清，留沉淀
试剂五（mL）
1.0
1.0
漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀。重复 3 次
试剂六（mL）
1.0
1.0
漩涡混匀，37℃温育 15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm 离心 15min，取 上清 1mL 于石英比色皿，试剂六调零，测定 OD370
 
三、计算公式 
1、按蛋白浓度计算： 
蛋白质羰基含量（μmol/mgprot）=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V 样品) =（OD370 测定管－OD370 空白管）÷4.4÷Cpr； 
2、按样本鲜重计算： 
蛋白质羰基含量（μmol/g 鲜重）=（OD370 测定管－OD370 空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V 样品÷V 提取) =（OD370 测定管－OD370 空白管）÷4÷W ε：蛋白质羰基消光系数，22mL•μmol-1•cm-1；d：比色皿光径，1cm；V：加入试剂六体积，1mL； V 样品：加入样本体积，0.2mL； V 提取：加入提取液及试剂一体积，1.1mL；Cpr：样本蛋白质浓 度，mg/mL。W：样品质量，g。
 
注意事项： 
1. 试剂一使用之前根据要测定的样品数现配，配置好后 4℃保存，若变为黑色，则不能使用。 
2. 试剂二见光易分解，反应需严格避光。